Муайян кардани миқдори кислотаи оксалат дар меваю сабзавот бо истифода аз хроматографияи моеъи баландсифат (HPLC)

Муайян кардани Кислотаи оксалатӣ Мундариҷа дар меваю сабзавот тавассути хроматографияи моеъи баландсифат (HPLC)
1. Тарроҳии принсип ва усули таҷрибавӣ
Миқдори кислотаи оксалатӣ ҳамчун кислотаи органикии маъмул дар меваю сабзавот, мустақиман ба таъм ва арзиши ғизоии хӯрок таъсир мерасонад. Ин таҷриба хроматографияи моеъи баландсифати фазаи баръакс (RP-HPLC)-ро истифода мебарад. Дар шароити фазаи сайёри кислотаӣ, кислотаи оксалатӣ аз моддаҳои халалдор бо истифода аз сутуни хроматографии C18 аз сатҳи ибтидоӣ ҷудо карда мешавад. Барои таҳлили миқдорӣ, ки ба хусусиятҳои ҷабби ултрабунафши гурӯҳҳои карбоксил дар молекулаҳои кислотаи оксалат асос ёфтааст, детектори ултрабунафш истифода мешавад.
2. Хати стандартӣ ва омодасозии намуна
Барои тайёр кардани маҳлулҳои стандартӣ усули обкунии градиентӣ истифода мешавад: 25,0 мг дигидрат кислотаи оксалатро дақиқ вазн кунед ва то 25 мл бо оби ултрапок об кунед, то маҳлули аслии 1 мг/мл ба даст оред. Ин пайваста ба як қатор маҳлулҳои стандартӣ бо ҳаҷми 50, 100, 200, 400 ва 800 мкг/мл об карда мешавад ва ҳар як консентратсия се маротиба ворид карда мешавад.
Барои тайёр кардани намуна, экстраксия бо ёрии печи микроволновка истифода мешавад: 5.00 г гомогенати мева/сабзавотро кашед, 10 мл маҳлули 0.1 мол/л кислотаи хлорид илова кунед, дар ҳарорати 60°C бо печи микроволновка барои 10 дақиқа коркард кунед, тавассути филтри мембранаи 0.45 µm филтр кунед ва филтратро барои санҷиш ҷамъ кунед.
3. Беҳсозии шароити хроматографӣ
Фазаи мобилӣ системаи буфери дигидрогени калий фосфати 0,01 мол/л (рН 2,5)-ацетонитрил (95:5) мебошад, ки суръати ҷараёни он 0,8 мл/дақ ва ҳарорати сутун 35°C аст. Танзими таносуби ацетонитрил нишон медиҳад, ки вақте ки фазаи органикӣ аз 10% зиёд мешавад, вақти нигоҳдории кислотаи оксалат то камтар аз 3 дақиқа кӯтоҳ мешавад, аммо дар авҷи таркиб ба амал меояд. Дар шароити ниҳоии оптимизатсияшуда, вақти нигоҳдории кислотаи оксалат 4,2 дақиқа аст, ки ҷудошавии пурра аз кислотаи лимуи ҳамшафат ва кислотаи малик ба даст меояд (қарор > 1,5).
4. Тасдиқи усул
Тасдиқи хаттии диапазон нишон медиҳад, ки робитаи хуби хаттӣ байни масоҳати қулла ва консентратсия дар диапазони 10-1000 мкг/мл (R² = 0.9993) вуҷуд дорад. Ҳадди ошкоркунӣ (LOD), ки бо усули таносуби сигнал ба садо муайян карда мешавад, 0.5 мкг/мл аст. Дар озмоишҳои такрорӣ, RSD барои шаш муайянкунии такрории ҳамон намунаи исфаноҷ 1.8% аст. Таҷрибаҳои барқароркунии хӯша дар се сатҳ (80%, 100% ва 120%) барқароркунии миёнаи мутаносибан 98.2%, 102.4% ва 97.8% -ро медиҳанд, ки ба талаботи таҳлили миқдорӣ ҷавобгӯ мебошанд.
5. Таҳлили намунаҳои воқеӣ
Шаш намуди меваю сабзавоти дастраси тиҷоратӣ санҷида шуданд: исфаноҷ (356 ± 12 мг/100 г), карафс (215 ± 9 мг/100 г), помидор (18 ± 2 мг/100 г), себ (6 ± 1 мг/100 г), банан (ошкор нашудааст) ва брокколи (89 ± 5 мг/100 г). Муқоиса бо усули стандартии миллӣ (GB 5009.277-2016) нишон медиҳад, ки фарқияти нисбӣ байни ин ду усул камтар аз 5% аст, ки эътимоднокии ин усулро тасдиқ мекунад. Аз ҷумла, усули HPLC ҳангоми таҳлили намунаҳои каммиқдор нисбат ба усулҳои анъанавии титркунӣ ҳассосияти баландтар нишон медиҳад.
6. Эзоҳҳои асосӣ
Ҳангоми коркарди пешакии намуна арзиши рН-ро қатъиян назорат кунед. Агар рН-и экстракт аз 3 зиёд бошад, боришоти оксалати калсий ба натиҷаҳои пасти санҷиш оварда мерасонад. Фазаи мобилӣ бояд ҳар рӯз тару тоза омода карда шавад, то аз боришоти намак ва басташавии сутун пешгирӣ карда шавад. Пас аз ҳар 20 сӯзандору, сутунро бо оби ацетонитрил (30:70) барои 30 дақиқа бишӯед, то аз паст шудани самаранокии сутун пешгирӣ кунед. Барои намунаҳои дорои пигмент (масалан, карами арғувонӣ), тавсия дода мешавад, ки пеш аз сӯзандору қадами тозакунии экстрактсияи фазаи сахт илова карда шавад.
7. Дастурҳои татбиқ ва васеъкунӣ
Ин усулро метавон барои муайян кардани кислотаи оксалат дар намунаҳои биологӣ, ба монанди пешоб ва хун, васеъ кард. Бо танзими таркиби фазаи мобилӣ (масалан, илова кардани тетрабутиламмоний гидроксид), кислотаи оксалат ва метаболитҳои онро ҳамзамон муайян кардан мумкин аст. Дар якҷоягӣ бо детектори спектрометрияи массавӣ, усули дақиқтари муайянкунии пайроҳӣ муқаррар кардан мумкин аст. Дар саноати коркарди хӯрокворӣ, ин усул метавонад барои интихоби навъҳои кислотаи камоксалат ва беҳсозии равандҳои пухтупаз дастгирии муҳими маълумотӣ фароҳам оварад.